HS RT qPCR Master Mix SYBR green, Taq polymérase

HS RT qPCR SYBR green est un « one step » master mix prêt à l’emploi pour la RT qPCR.

Il s’agit ici d’un mélange conventionnel destiné à la reverse transcription en temps réel de routine. Le master mix comprend une reverse transcriptase et une Taq polymérase, ainsi qu’un colorant fluorescent SYBR green 1. Un colorant inerte bleu a aussi été ajouté à cette formulation, de manière à faciliter la distribution de la préparation dans les puits.

La transcriptase inverse utilisée dans le HS RT qPCR SYBR green, est issue du rétrovirus de la leucémie murine (MuLV) et possède aussi bien une propriété polymérase arn dépendante, que adn dépendante. Cette caractéristique lui permet de synthétiser un cDNA à partir d’un arn ou d’un adn simple brin. L’absence d’activité RNase H favorise d’autre parts l’obtention de brin long.

La MuLV Reverse Transcriptase présente une bonne résistance à la chaleur (jusqu’à 50 °C) et à son maximum d’activité à 45 °C.

La polymérase du mélange HS RT qPCR SYBR green est une Taq polymérase disposant d’une fonctionnalité hot start par l’intermédiaire d’une inhibition par anticorps. L’enzyme est ainsi inactive pendant la phase de reverse transcription et n’est opérationnelle qu’après un chauffage à 95 °C pendant 5 minutes. Cette caractéristique évite les hybridations non spécifiques et l’amplification de dimères d’amorces.

Par ailleurs, l’utilisation d’un mélange de type master mix diminue non seulement le temps de préparation, mais réduit également le nombre d’étapes de pipetage et limite donc le risque de contaminations croisées. Ces avantages assurent une meilleure reproductibilité des résultats et contribuent à faciliter la réalisation de la RT qPCR.

HS RT qPCR SYBR green se présente sous forme d’une solution concentrée 2X associé à un tampon de réaction et est destiné à être employé dans des milieux réactionnels entre 25 et 50 µl. Il contient tous les éléments nécessaires à la reverse transcription, y compris les dNTPs ultra purs. (l’ARN matrice et les amorces ne sont pas inclus)

Conditionnement :

Réf. : 4010.500

500 réactions, selon le protocole à respectivement 20 µl de milieu réactionnel