SCRibo HS RT PCR Master Mix Load

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HS RT PCR master mix Load est un « one step » master mix prêt à l’emploi destiné à la reverse transcription PCR classique (en point final) de routine et comprend un tampon de charge.

La transcriptase inverse utilisée dans le HS RT PCR master mix Load, est issue du rétrovirus de la leucémie murine (MuLV) et possède aussi bien une propriété polymérase arn dépendante, que adn dépendante. Cette caractéristique lui permet de synthétiser un cDNA à partir d’un arn ou d’un adn simple brin. L’absence d’activité RNase H favorise d’autre parts l’obtention de brins long.

La MuLV Reverse Transcriptase présente une bonne résistance à la chaleur (jusqu’à 50 °C) et à son maximum d’activité à 45 °C.

La polymérase du mélange HS RT PCR master mix Load est une Taq polymérase disposant d’une fonctionnalité hot start par l’intermédiaire d’une inhibition par anticorps. L’enzyme est ainsi inactive pendant la phase de reverse transcription et n’est opérationnelle qu’après un chauffage à 95 °C pendant 5 minutes. Cette caractéristique évite les hybridations non spécifiques et l’amplification de dimères d’amorces.

La Taq polymérase de ce master mix a conservée son activité terminale transférase, ajoutant une adénine à l’extrémité 3’ de l’amplicon. Une extrémité 3’-dA sortante est dès lors disponible pour une utilisation en clonage par vecteur T.

Par ailleurs, l’utilisation d’un mélange de type master mix diminue non seulement le temps de préparation, mais réduit également le nombre d’étapes de pipetage et limite donc le risque de contaminations croisées. Ces avantages assurent une meilleure reproductibilité des résultats et contribuent à faciliter la réalisation de la RT PCR.

Le tampon de charge intégré (*), permet de charger directement les puits d’un gel d’électrophorèse.

HS RT PCR master mix Load se présente sous forme d’une solution concentrée 2X associé à un tampon de réaction et est destiné à être employé dans des milieux réactionnels entre 25 et 50 µl. Il contient tous les éléments nécessaires à la reverse transcription, y compris les dNTPs ultra purs. (l’ARN matrice et les amorces ne sont pas inclus)

(*) xylène cyanol, bleu de bromophénol, Orange G, tartrazine

Conditionnement :

Réf. : 3085.500

500 réactions, selon le protocole à respectivement 20 µl de milieu réactionnel

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